Speaker
Description
Fluiditatea membranei plasmatice este definită prin gradul de libertate a mișcării lipidelor. Aceasta este esențială pentru permeabilitatea celulară și funcția proteinelor membranare. Fluiditatea este dată de proprietățile bistratului lipidic, fiind influențată de împachetarea fosfolipidelor, saturația lanțurilor acilice, dar și concentrația de colesterolului.
Pentru a evalua această caracteristică am folosit tehnicile de spectroscopie de fluorescență statică, cât și cea rezolvată în timp, utilizând markerul fluorescent Laurdan. Am folosit această probă pentru a caracteriza membrane lipidice model - lipozomi (DOPC, DPPC, POPC) și membrane celulare (L929, B16), calculând polarizarea generalizată (GP) și timpul de viață a fluorescenței pentru a determina tranzițiile de fază și impactul prezenței colesterolului la temperaturi care au variat între 10-60॰C.
Pentru modelele membranare care sunt preparate din DPPC s-a putut observa tranziția de fază la ~42॰C,atât prin utilizarea GP-ului, cât și timpul de viață. DOPC și POPC au avut rezultate similare, ele aflându-se într-o fază lichidă, însă valorile de GP și timp de viață au scăzut, indicând o relaxare neradiativă și un quenching termic. Adăugarea colesterolului la membranele cu DPPC a rezultat într-o mediere a tranziției de fază, iar în cazul cu POPC, nu a avut o influență semnificativă. Rezultatele de pe celule indică o fluiditate generală mare a membranei, având timpi de viață mici ~3-5 ns.
În concluzie, analiza combinată a polarizării generalizate (GP) și a timpului de viață al fluorescenței probei Laurdan reprezintă o metodă robustă și sensibilă pentru monitorizarea dinamicii lipidice. Studiul confirmă experimental rolul esențial al colesterolului de a acționa ca un tampon fluidizant. Mai important, timpii scurți de viață măsurați pe liniile celulare L929 și B16 demonstrează că, in vivo, membranele biologice adoptă o stare pronunțat fluidă și dinamică.